EKSPRESI PROTEIN COAT DAN mRNA VIRAL NERVOUS NECROSIS YANG DIKENDALIKAN OLEH PROMOTER Î²-AKTIN IKAN MEDAKA DAN KERATIN IKAN FLOUNDER JEPANG - Andriyani, Wiwien Mukti; Murtini, Sri; Alimuddin, Alimuddin; Wibawan, I.W. Teguh (Jurnal Riset Akuakultur, 2014)
Kemampuan promoter dalam mengatur ekspresi gen penyandi protein imunogenikÂ sangat menentukan efikasi suatu vaksin DNA. Penelitian ini bertujuan untuk mengukurÂ tingkat ekspresi protein dan mRNA RNA2 penyandi coat protein (CP) virus viral nervousÂ necrosis (VNN) yang dikendalikan oleh dua promoter berbeda, yaitu promoter Î²-aktinÂ ikan medaka (mBA), dan keratin ikan flounder Jepang (JfKer). Uji ekspresi CP dilakukanÂ menggunakan embrio ikan lele dumbo (Clarias sp.) sebagai model, sedangkan analisisÂ mRNA dilakukan menggunakan ikan kerapu tikus. Konstruksi vektor ekspresi pmBA-CPÂ dan pJKer-CP dengan konsentrasi 50 ng/Î¼L KCl 1 M disuntikkan ke embrio ikan leleÂ dumbo fase 1-2 sel. Sebanyak 30 embrio ikan lele dumbo diambil pada jam ke-6, 8, 10,Â 12, 14, dan 16 pascainjeksi untuk analisis protein. Hasil SDS-PAGE menunjukkan adanyaÂ protein berukuran sekitar 42 kDa, dan analisis western blot menggunakan antibodiÂ (Ab) poliklonal anti-VNN membuktikan bahwa protein tersebut adalah CP. KeberhasilanÂ deteksi protein spesifik menggunakan Ab anti-VNN tersebut menunjukkan bahwaÂ embrio ikan lele dapat digunakan untuk menguji potensi produksi protein imunogenikÂ yang dikendalikan oleh promoter berbeda. Pengujian ini juga menunjukkan bahwa,Â aktivitas promoter mBA lebih tinggi daripada promoter JfKer, sehingga uji ekspresiÂ mRNA dilakukan menggunakan konstruksi pmBA-CP. Benih ikan kerapu tikus (panjangÂ badan sekitar 5 cm) diinjeksi dengan pmBA-CP secara intramuskular dengan dosisÂ 12,5 Î¼g/ekor. Total RNA diekstraksi dari daging pada waktu 6, 12, dan 24 jamÂ pascainjeksi. Hasil RT-PCR menunjukkan adanya ekspresi mRNA CP pada 24 jamÂ pascainjeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa promotor mBA aktif mengendalikanÂ ekspresi CP pada ikan kerapu tikus, dan pmBA-CP berpotensi digunakan sebagai vaksinÂ DNA untuk menginduksi kekebalan ikan kerapu terhadap infeksi VNN.